PCR基因擴增儀“位置的邊緣效應”實驗過程
PCR基因擴增儀主要是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。PCR儀的原理為利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。
PCR原理為雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶的作用下,以單鏈為模版,根據(jù)堿基互補配對原則復制成新的單鏈,與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設(shè)計與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制,多次重復“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級數(shù)大量擴增特定的基因。這就是PCR實驗過程.
想得到一個的PCR實驗結(jié)果,zui關(guān)鍵所使用的PCR基因擴增儀,溫度均性是否穩(wěn)定均勻.PCR溫度均勻是指樣品孔間的溫度差異,它關(guān)系到在不同樣品孔進行反應結(jié)果的一致。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,zui后的結(jié)果竟然差異非常明顯,或許就是因為不同位置的溫度不均一性所致。所以一些實驗人在做實驗中就固定用著那幾個孔,就是因為過往反復的教訓和認真的思索得出的結(jié)果.這個被我們稱為“位置的邊緣效應”,即原因就是PCR儀的溫度均勻性不好,特別是zui外周的樣品孔,溫度不均勻就會影響實驗結(jié)果。